【摘要】目的优选出牡丹皮的最佳产地加工方法。方法以丹皮酚为指标，用高效液相色谱（HPLC）色谱法测定不同产地加工方法样品中的含量，选用ODS色谱柱，流动相为甲醇-水（45∶55），检测波长为274nm，同时测定不同洗涤样品中灰分和酸不溶灰分的含量。结果确定最佳产地加工方法为：将牡丹皮药材水冲淋后去除木心，然后直接晒干或40℃烘干。结论该研究为牡丹皮的产地加工提供了依据，并为其质量控制提供了有效的方法。
【关键词】牡丹皮产地加工高效液相色谱丹皮酚
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牡丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹。的根皮。性微寒，味苦、辛。归心、肝、肾经。具有清热凉血、活血化淤之功效。目前，牡丹皮正作为一种传统中药被日益重视和广泛应用。自唐代以来，牡丹之盛，莫过于洛阳，以“洛阳牡丹甲天下”的美名流传于世，洛阳的牡丹皮产量较大，本文对洛阳牡丹皮的产地加工方法进行系统地研究，为洛阳牡丹皮的合理开发、利用提供依据，为其质量控制提供有效的方法。
1材料与试剂
2010A高效液相色谱仪（日本岛津），PDAD检测器，色谱柱(5μm，4。6mm×250mm)；型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。
甲醇（天津科密欧化学试剂开发中心，分析纯）；甲醇（天津四友生物医学技术有限公司，色谱纯）；水为娃哈哈纯净水；丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号）。
2牡丹皮的采收方法〔1，2〕
牡丹皮的栽培方法通常有种子繁殖和分株繁殖两种，一般均在移栽后3～4年采收。每年的采收季节一般为春季和秋季，但目前多在秋分和寒露之间，地上枝叶变黄枯萎时采挖。
选择晴天，将四周的土壤挖开，将挖出的根除去茎苗和泥土，用力碾转顶端使根皮一侧破裂，皮心略脱离，一手捻住不裂口的一侧，一手捏住木心，把木心顺破裂口往下边拉，边分离边剥出，除去木心后顺手把根条捻直，并撮合裂缝口，晒干，即为商品“牡丹皮”。
3产地加工方法的研究
3。1样品的采集牡丹皮药材采自洛阳市土桥村，药材均为分株移植3年的牡丹皮，每份样品按照不同地点各采集3批。经河南中医学院生药教研室曹继华教授鉴定为毛茛科植物牡丹。的干燥根皮。
3。2各种加工品的制备
3。2。1不同洗涤样品的制备
挖取牡丹的根，分成3份，分别采用水淘洗、水冲淋及未洗涤3种方法，然后抽去木心，将根皮晒干，粉碎成粗粉，备用。
3。2。2不同干燥方法样品的制备
挖取牡丹的根，抽去木心，将根皮分成3份，分别采用直接晒干、40℃烘干与60℃烘干3种方法进行干燥，粉碎成粗粉，备用。
3。2。3不同部位样品的制备
挖取牡丹的根，用水迅速冲淋，晾至外表栓皮上无水分，刮取栓皮部，抽取木心，并按照木心的直径将其分为粗木心（直径为3～5mm）、中木心（直径为1～3mm）和细木心（直径为0。5～1mm），将栓皮部、韧皮部及木心部（3种规格）分别晒干，粉碎成粗粉，备用。
3。3方法和结果
3。3。1色谱条件
色谱柱：色谱柱(5μm，4。6mm×250mm)；流动相：甲醇-水（45：55）；检测波长274nm；柱温30℃；流速1。0ml·min-1；进样量10μl。
3。3。2对照品溶液的制备
精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解配制成23。7μg/ml的对照品溶液。
3。3。3供试品溶液的制备
称取各份样品粗粉约0。5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0。45μm的滤膜滤过，即得各供试品溶液。
3。3。4线性关系考察
精密吸取对照品溶液各2，4，8，12，16[52石斛网www.52shihu.com]，20μl注入高效液相色谱仪，以对照品的量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，Y＝5318。622X－7296。940，r＝0。9999，表明丹皮酚含量在47。4～474。0μg之间线性关系良好。
3。3。5精密度实验
精密吸取对照品溶液10μl，按照上述色谱条件连续进样5次，依法测定，以丹皮酚峰面积计算，-X=。4，RSD=0。42%，符合要求。
3。3。6重复性实验
取同一份样品粉末5份，按照供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取各供试品溶液10μl，按照上述色谱条件连续进样5次，以丹皮酚峰面积计算，-X=。6，RSD=0。44%，符合要求。
3。3。7稳定性实验
精密吸取同一份供试品溶液10μl，按照上述色谱条件在0，0。5，1，2，3，4h进行测定，以丹皮酚峰面积计算，-X=。8，RSD=0。72%，表明样品在4h内基本稳定。
3。3。8加样回收率实验
取已知含量的牡丹皮生药粉末9份，每份0。25g，分别精密称取，并分别精密加入高、中、低不同剂量丹皮酚对照品，按照供试品溶液的制备方法制备得到样品溶液，再照上述色谱条件进行丹皮酚的含量测定，计算加样回收率，结果见表1。表1加样回收率实验结果（略）
3。3。9样品的测定
分别精密吸取上述各供试品溶液（各3份）及对照品溶液各10μl，按照上述色谱条件进行测定，将所得丹皮酚峰面积带入回归方程计算，得到牡丹皮不同加工品中丹皮酚的含量。结果分别见表2～4。表2不同洗涤样品中丹皮酚的含量（略）表3不同干燥方法样品中丹皮酚的含量（略）表4不同部位样品中丹皮酚的含量（略）
3。4不同洗涤丹皮样品中总灰分和酸不溶性灰分的测定
3。4。1测定方法
分别取上述3种洗涤方法所得的牡丹皮样品约4g，精密称定，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至550℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量。另取以上所得灰分，在坩埚中加入稀盐酸约10ml，盖上表面皿，水浴上加热10min，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重，根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量。
3。4。2测定结果
结果见表5。表5不同洗涤样品中总灰分和酸不溶性灰分测定结果（略）
4讨论
由表2和表5可知，水淘洗丹皮样品与未洗涤样品比较，丹皮酚含量损失较多，水冲淋样品中丹皮酚含量损失不多，水淘洗和水冲淋样品与未洗涤样品比较，总灰分和酸不溶灰分均降低，《中国药典》2005年版Ⅰ部“牡丹皮”项下规定样品中总灰分不得多于5。0%，酸不溶灰分不得多于1。0%〔3〕，本实验中3种样品均符合规定，但未洗涤样品中的含量偏高，综合考虑，笔者建议采用水冲淋的方法洗涤药材。
由表3中可知，不同干燥方法所得样品中丹皮酚的含量顺序为：晒干＞40℃烘干＞60℃烘干，由于丹皮酚的沸点约为50℃，因此60℃烘干样品中丹皮酚大量挥发损失较大，因此可采用晒干或40℃烘干来干燥样品，对于无条件进行烘干的可采用晒干的方法进行干燥，如果天气不好或样品急需干燥时可采用40℃烘干的方法来干燥样品。
由表4可知，栓皮部与韧皮部比较，其丹皮酚的含量约高出1倍，不同粗细的木心部中含量差别不大，接近韧皮部的1/2，笔者通过测定重量，发现栓皮部、韧皮部、木心部分别占总重量的8。14%，81。42%和10。44%，因此考虑可以不去皮而只去心，既能简化产地加工的繁琐程序又能提高样品中丹皮酚的含量。